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翻译样例: 携带HBV C基因重组MVA假病毒颗粒的构建及其抗原性鉴定
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目前, 基因治疗选用的病毒载体主要有痘苗病毒、腺病毒、腺相关病毒和逆转录病毒等。痘苗病毒作为基因治疗的载体具有以下优势: ( 1) 属于非复制型病毒, 仅在鸡胚成纤维细胞及地鼠肾细胞中繁殖, 在人体内不可复制, 具有很高的安全性; ( 2) 痘病毒作为最大、最复杂的一类病毒, 具有大型的复杂结构, 包含大量多肽和酶, 具有良好的免疫原性, 载体本身具有佐剂的功能; ( 3) 通过皮肤划痕即可接种, 具有很高的感染效率; ( 4) 外源基因容量大, 能够同时容纳、表达多个外源基因。

以HBV adr 亚型preC-C 基因为模板, 以引物1 和引物2 经PCR 扩增C基因片段。将所得C 片段与克隆载体peasy-T 连接,转化入感受态细胞DH5α。在含有氨苄青霉素琼脂平板上通过蓝白斑筛选挑选白色克隆, 得到重组克隆T-C, 经测序鉴定。

将所得T-C 质粒和pSC11 质粒经限制性内切酶SalI 和NotI 消化, 电泳后用博大泰克胶回收试剂盒回收目的片段, 经T4 DNA 连接酶16 ℃连接过夜。将连接产物转化入感受态细胞DH5α, 涂布于含有氨苄青霉素抗性的琼脂平板。通过蓝白斑筛选挑选蓝色克隆pSC11-C , 提取质粒, 经限制性内切酶SalI 和NotI 双酶切鉴定。

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