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翻译样例: FMDV抗原表位与hsp70的融合表达及表达产物对小鼠的免疫应答
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将人工合成的O型口蹄疫病毒主要表位基因与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin平板筛选重组子,PCR鉴定后甲醇诱导表达。SDS-PAGE显示,其相对分子质量为89 000,表达量约为190 mg•L^(-1);免疫印迹分析证实表达产物具有免疫反应性。融合蛋白以皮下接种的方式对8只小鼠进行3次免疫,然后通过ELISA和MTT分别检测抗体水平和淋巴细胞增殖反应。结果表明,融合蛋白既能诱导细胞免疫应答,又能诱导体液免疫应答,其产生的抗体水平接近于常规灭活疫苗。MTT试验结果显示,融合蛋白的A570为0.381±0.072,灭活疫苗的A570为0.340±0.050,表明融合蛋白的细胞免疫应答水平高于后者。提示,hsp70作为分子佐剂在口蹄疫基因工程疫苗研究中具有很好的应用前景。

在质粒载体pcDNA3.1 的CMV启动子下游,经Kpn I、Not I酶切位点定向插入融合基因片段SC,以获得重组质粒pcDNA3.1-SC(图2).具体操作:采用Kpn I、Not I双酶切SC片段和质粒载体pcDNA3.1,酶切后的SC片段与pcDNA3.1按摩尔数之比1:4混合,然后加入等体积DNA连接试剂,16°C放置过夜.将连接产物转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.重组质粒送交上海基康公司测序无误后,命名为pcDNA3.1-SC;以pcDNA3.1-SC转染sp2/0细胞后,能稳定地共表达HBsAg和HBcAg蛋白.将pcDNA3.1-SC质粒大量扩增、纯化、鉴定后分装,储存于-80°C备用.

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